新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因表达载体的构建及真核表达

作     者：呙会会 刘垒 周祖涛 李筱雯 金卉 肖运才 王贵强 GUO Hui-hui;LIU Lei;ZHOU Zu-tao;LI Xiao-wen;JIN Hui;XIAO Yun-cai;WANG Gui-qiang

作者机构：华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 湖北省畜禽育种中心湖北武汉430070 

基　　金：湖北省自然科学基金项目(2010CDB10101) 湖北省农业创新岗位基金 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第35卷第6期

页      码：1-5页

摘      要：为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒La Sota株NP、P和L基因的真核表达载体。根据GenBank中新城疫La Sota株的全长序列(JF950510.1),设计4对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒La Sota株的NP、P和L基因,将其克隆到真核载体pCl-neo上。通过酶切和测序验证克隆正确,得到重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L,瞬时转染到BHK-21细胞中。经RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光试验分别检测NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。经上述三种方法分别检测到NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。重组质粒pCl-NP、pCl-P和pCl-L构建成功,为后期新城疫病毒反向遗传操作系统的构建奠定了基础。

主 题 词：新城疫病毒 P和L基因 辅助质粒 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2014.06.001

馆 藏 号：203458580...