敖汉细毛羊Notch1基因真核表达载体的构建及在成纤维细胞中表达量的研究

作     者：赵然然 张梦瑶 刘开东 王国义 刘积凤 柳楠 贺建宁 ZHAO Ranran;ZHANG Mengyao;LIU Kaidong;WANG Guoyi;LIU Jifeng;LIU Nan;HE Jianning

作者机构：青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 青岛畜牧兽医研究所山东青岛266100 赤峰市敖汉旗种羊场内蒙古赤峰024300 

基　　金：国家自然科学基金项目(31402047) 国家绒毛用羊产业技术体系专项资金(CARS-39-05) 青岛农业大学高层次人才科研基金(631410) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第51卷第3期

页      码：1-6页

摘      要：本研究旨在构建敖汉细毛羊Notch1基因表达载体及转染成纤维细胞后基因表达量变化。试验以敖汉细毛羊40日龄胎儿为研究对象,提取RNA反转录并参照Gen Bank中Notch1基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Notch1基因片段,将得到的Notch1基因片段连接至pGM-T载体,构建pGM-T-Notch1克隆载体并转化大肠杆菌(***) DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定后构建pcDNA3.1-Notch1重组表达载体,转化大肠杆菌(***) DH5α感受态细胞。将敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3.1-Notch1瞬时转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术检测Notch1基因在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示:经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Notch1构建成功,并且转染成纤维细胞后Notch1基因的表达量升高,且转染组的表达量极显著地高于对照组(P<0.01)。结论:成功构建了敖汉细毛羊Notch1基因的表达载体,并且成功转染成纤维细胞,基因表达量明显升高,结果可为进一步研究其功能奠定基础。

主 题 词：成纤维细胞 表达载体构建 Notch1转染 RT-PCR 基因表达 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

馆 藏 号：203458855...