重组表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的慢病毒的包装及鉴定

作     者：戴胜兰 邱彩玉 姚俊 许亚平 DAI Shenglan;QIU Caiyu;YAO Jun;XU Yaping

作者机构：江苏大学附属人民医院消化内科江苏镇江212002 

基　　金：江苏省自然科学基金面上项目(BK20181225) 江苏省镇江市科技创新(重点研发计划-社会发展)项目(SH2016040) 

出 版 物：《中国医药导报》 (China Medical Herald)

年 卷 期：2019年第16卷第4期

页      码：9-12,17页

摘      要：目的构建和包装稳定表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的重组慢病毒,为慢性乙型肝炎免疫治疗的实验研究奠定基础。方法设计引物通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因Ub-HBcAg,Ub-HBcAg基因与经酶切线性化的慢病毒表达载体质粒pLenti-CMV-HA-3Flag-P2A-EGFP定向连接,其产物pLenti-CMVUb-HBcAg-HA-3Flag-P2A-EGFP转化大肠杆菌菌株DH5α感受态细胞,挑选阳性克隆进行PCR鉴定和直接测序序列分析。将化学合成的T2A-Tapasin基因插入至pLenti-CMV-Ub-HBcAg-HA-3Flag-P2A-EGFP,其产物p Lenti-CMV-Ub-HBcAg-HA-T2A-Tapasin-3Flag-P2A-EGFP经直接基因测序分析后与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒p LP/VSVG共转染人胚肾293T细胞,得到携带有Ub-HBcAg基因和Tapasin基因的重组慢病毒颗粒LV-Ub-HBcAg/Tapasin,重组慢病毒颗粒转染293T细胞,实时荧光定量PCR检测慢病毒浓缩液的滴度,Western blot法检测目的基因的表达。结果成功构建和包装了表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的重组慢病毒,实时荧光定量PCR证实重组慢病毒的滴度达3.25×10~8TU/mL。结论成功构建稳定表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的重组慢病毒,为慢性乙肝的免疫治疗提供了实验基础。

主 题 词：慢病毒 乙型肝炎核心抗原 泛素 分子伴侣Tapasin 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

馆 藏 号：203459004...