用荧光定量RT-PCR方法检测新型鸭呼肠孤病毒

作     者：韩宏宇 马秀丽 黄兵 李建亮 张玉瑶 于可响 崔言顺 HAN Hong-yu;MA Xiu-li;HUANG Bing;LI Jian-liang;ZHANG Yu-yao;YU Ke-xiang;CUI Yan-shun

作者机构：山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所禽病研究中心山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室山东济南250023 

基　　金：山东省海外高层次人才(泰山学者)引进计划 山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队计划(SDAIT-13-011-01) 公益性行业(农业)科研专项(201003012) 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2015年第27卷第8期

页      码：1331-1336页

摘      要：根据新型鸭呼肠孤病毒（novel duck reovirus,NDRV）S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低可检出15个拷贝的病毒c DNA,其病毒最低检出量为0.5TCID50。该方法具有良好的特异性,对鸭坦布苏病毒（DTMUV）、A型鸭甲肝病毒（DHV-1）、C型鸭甲肝病毒（DHV-3）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、减蛋综合征病毒（EDSV）、鸭新城疫病毒（NDV）、鸭瘟病毒（DPV）、鸭疫里默氏杆菌（RA）的检测结果均为阴性。该方法重复性好,组内变异系数为0.32%~0.91%,组间变异系数为1.03%~1.51%。利用该方法对人工感染雏鸭的粪便排毒情况进行检测,结果发现,攻毒后2~12 d是粪便排毒期,其中3~6 d是排毒高峰期。临床样品检测结果表明,该方法比常规RT-PCR具有更高的敏感性,而且从收到样品到得出检测结果只需4 h。

主 题 词：新型鸭呼肠孤病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-1524.2015.08.04

馆 藏 号：203459242...