小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选

作     者：杨显英 熊显荣 韩杰 黄向月 王艳 阿果约达 李键 YANG Xianying;XIONG Xianrong;HAN Jie;HUANG Xiangyue;WANG Yan;A GUO Yueda;LI Jian

作者机构：西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室成都610041 

基　　金：四川省科技支撑计划(2017NZ0076) 牦牛遗传资源与保护创新团队(13CXTD01) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2019年第50卷第2期

页      码：446-453页

摘      要：旨在选择小鼠卵巢组织中合适的内参基因,为研究卵巢发育过程中基因表达提供可靠数据。以不同年龄(0日龄、3周龄、5周龄、8周龄)小鼠卵巢组织为试验材料,Trizol法提取样本总RNA,并合成cDNA,根据已报道的小鼠(Mus musculus)各组织中相对稳定表达的8个常见内参基因(Gapdh、β-actin、β-tubulin、18S rRNA、16S rRNA、H2afz、Ubc、Rpl13a)的GenBank登录序列设计引物,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法构建卵巢cDNA等梯度(1∶10)稀释后的标准曲线;利用geNorm分析候选内参基因的表达稳定性(M);NormFinder筛选表达最稳定的内参基因;BestKeeper计算qRT-PCR结果的标准差(SD)和变异系数(CV),从而预测候选内参基因的稳定性。结果表明,8个内参基因的引物特异性较强,具有良好的线性关系;候选内参基因的表达稳定度排序:Gapdh=β-actin>18S rRNA>Ubc>16S rRNA> H2afz>Rpl13a>β-tubulin;其中Gapdh表达稳定性最好,且标准差及方差系数最小(SD:0.32,CV:1.95),H2afz标准差及方差系数最大(SD>1.0,CV:5.76)。综上表明,本研究成功获得出生后小鼠卵巢发育过程中稳定表达的内参基因(Gapdh和β-actin),可作为其基因表达研究中的最佳候选内参。

主 题 词：小鼠 卵巢 qRT-PCR 内参基因 表达稳定性 

学科分类：08[工学] 0905[农学-林学类] 09[农学] 0836[0836] 090501[090501] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2019.02.024

馆 藏 号：203459448...