重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究

作     者：伍娜娜 荣娜 康超 刘祥 陈琛 陈春琳 马心怡 吴三桥 WU Nana;RONG Na;KANG Chao;LIU Xiang;CHEN Chen;CHEN Chunlin;MA Xinyi;WU Sanqiao

作者机构：陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所陕西汉中723001 陕西省天麻山茱萸工程技术研究中心陕西汉中723001 

基　　金：陕西省教育厅科学研究计划项目(17JK0137) 陕西理工大学人才项目(SLGQD1803) 国家外国专家局项目(GDT20186100426) 

出 版 物：《河北农业大学学报》 (Journal of Hebei Agricultural University)

年 卷 期：2019年第42卷第1期

页      码：99-105页

摘      要：为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性。使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析。结果表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符。正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230r/min,装液量为50mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),37℃诱导12h。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白。蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性。OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。

主 题 词：铜绿假单胞菌 外膜蛋白OprD 多克隆抗体 诱导条件 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13320/j.cnki.jauh.2019.0017

馆 藏 号：203459808...