集成干扰素突变体的构建、表达及纯化

作     者：张静 刘金毅 周敏毅 牛晓霞 曹凯 

作者机构：承德医学院中药研究所河北承德067000 北京三元基因工程有限公司北京102600 

基　　金：北京市科技计划项目(D0205001040321) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2009年第22卷第5期

页      码：486-489页

摘      要：目的构建高效且可供单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺(mPEG-MAL)定点修饰的集成干扰素突变体(IIFNm108),并进行表达、纯化及鉴定。方法采用同源序列对比、空间结构模拟并结合α干扰素与受体结合的特点设计突变位点。用重叠延伸PCR法,扩增IIFNm108基因,与pET-23b载体连接,构建重组表达质粒pET-23b-IIFNm108,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,所得包涵体经变性、复性、DEAE阴离子交换及凝胶过滤两步层析纯化后,进行各项鉴定。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确。目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以包涵体形式存在。纯化的IIFNm108蛋白纯度大于95%,比活性约为(2.08±0.17)×108IU/mg,N-端、C-端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量为19500,可与mPEG-MAL成功交联。结论已获得一种高效且可供mPEG-MAL定点修饰的集成干扰素突变体IIFNm108。

主 题 词：集成干扰素 突变体 聚乙二醇修饰 表达 纯化 

学科分类：071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 0817[工学-轻工类] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2009.05.67.zhangj.009

馆 藏 号：203465176...