牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

作     者：郑东 孔凡芝 王胜军 苏兆亮 仝佳 杨恒 赵银霞 王楷文 许化溪 

作者机构：江苏大学检验医学研究所免疫学研究室江苏镇江212013 江苏大学附属人民医院口腔科江苏镇江212013 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30871193 30972748) 江苏省社会发展基金资助(BS2007041) 江苏省六大高峰人才资助项目(07-B-34) 江苏大学大学生科研立项(08A018) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2010年第26卷第6期

页      码：572-574页

摘      要：目的:克隆牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB基因、原核表达并制备牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB多克隆抗体。方法:根据牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB的DNA序列,设计特异性引物并经PCR扩增其基因。扩增产物经鉴定和测序分析后,与质粒pET-32a(+)重组形成pET-32a-ragB,继而转化大肠埃希菌。IPTG诱导重组蛋白的表达,再通过Ni-NTA亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定;获得的重组蛋白行常规家兔免疫,以制备多克隆抗体,并应用ELISA测定抗体效价。结果:PCR扩增获得编码区全长为1506bp可编码501个氨基酸的RagB基因,测序结果与GenBank公布的序列(AJ130872)完全一致;构建了pET-32a-ragB原核表达载体,获得了高表达的融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western blot表明具有较高的纯度;ELISA结果显示,特异性兔抗RagB的多克隆抗体效价为1×105。结论:在成功构建牙龈卟啉菌外膜蛋白RagB原核表达载体的基础上,高效表达及纯化了RagB融合蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体。为进一步开展牙龈卟啉菌疫苗研究、建立牙龈卟啉菌感染的实验室诊断方法奠定了基础。

主 题 词：牙龈卟啉菌 外膜蛋白RagB 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.005474

馆 藏 号：203465438...