人CDK2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：黄宪章 王前 郑磊 陈晓 熊石龙 包杰 丁海明 黄妩姣 庄俊华 

作者机构：南方医科大学南方医院检验医学中心广东广州510515 广东省中医院检验科广东广州510120 

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(No07004832) 广东省科学计划课题资助项目(No2006B36003006) 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2008年第24卷第6期

页      码：1246-1248页

摘      要：目的:构建人细胞周期素依赖蛋白激酶2(CDK2)基因RNA干扰慢病毒载体。方法:利用Invitro-gen公司在线软件设计人CDK2(NM001798)shRNA序列,退火形成dsoligo后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序,再与慢病毒载体重组,测序鉴定,在脂质体的介导下将慢病毒的包装混合物和CDK2基因重组慢病毒载体转染293FT细胞,包装成病毒后,收集细胞培养上清液,测定病毒滴度。结果:测序证实pENTRTM/U6-CDK2-shRNA为阳性克隆,与慢病毒载体重组后测序结果显示也为阳性克隆,CDK2基因重组慢病毒载体传染293FT细胞后48h,细胞培养上清液,病毒的滴度为6×108TU/L。结论:成功构建人CDK2基因RNAi慢病毒载体,为研究CDK2在自身免疫病中的应用提供了稳定的转染细胞载体。

主 题 词：基因 CDK2 RNA干扰 慢病毒载体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-4718.2008.06.044

馆 藏 号：203465938...