人骨肉瘤mta1 mRNA的siRNA载体构建及其对mta1沉默作用

作     者：海国栋 赵国强 赵明耀 HAI Guo-dong;ZHAO Guo-qiang;ZHAO Ming-yao

作者机构：450052河南省郑州市骨科医院 郑州大学基础医学院微免教研室 郑州大学基础医学院病生教研室 

出 版 物：《中国临床实用医学》 (China Clinical Practical Medicine)

年 卷 期：2007年第1卷第4期

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摘      要：目的 本实验拟构建针对mta1mRNA的siRNA重组载体,将siRNA对应的DNA发卡样双链序列克隆入载体内,位于H1启动子下游,转染人人骨肉瘤细胞内,在细胞内表达mta1靶向的siRNA分子,特异性沉默mta1的表达.方法 依据GenBank中mta1基因(NM-004689)的序列,用设计分析软件进行设计候选序列,确定针对mta1的siRNA序列.合成mta1发卡样siRNA寡核苷酸,退火成双链DNA,克隆入T载体,利用α互补和T7/SP6 PCR扩增筛选鉴定重组子pGEM-T-mta1;用BglⅡ和HindⅢ双酶切重组子pGEM-T-mta1和siRNA表达载体pSuperneo;将双粘mta1发卡样siRNA片段亚克隆入siRNA表达载体pSuperneo中;利用Bg1Ⅱ和HindⅢ双酶切筛选鉴定重组子pSuperneo-mta1;对插入序列进行DNA序列分析.将siRNA表达载体pSuperneo-mtal转入人骨肉瘤细胞系MG-63中,用RT-PCR方法检测细胞mta1mRNA表达水平.结果 转染pSuperneo-mta1的实验组骨肉瘤细胞中mta1mRNA表达几乎完全被抑制,而2个对照组(无关siRNA对照组和空载体对照组)和未转染的骨肉瘤细胞系MG-63细胞中都存在较高水平的mta1mRNA表达.结论 设计出针对mta1的发卡样siRNA寡核苷酸片段,成功构建出针对mta1的siRNA表达载体pSuperneo-mta1,pSuperneo-mta1转染骨肉瘤细胞后能显著降低细胞mta1mRNA表达.

主 题 词：mta1 RNA干扰 基因沉默 骨肉瘤 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203469949...