16S rDNA用作荧光定量PCR靶基因快速检测铜绿假单胞菌

作     者：薛利军 王永智 任浩 童一民 赵平 朱诗应 戚中田 XUE Li-Jun;WANG Yong-Zhi;REN Hao;TONG Yi-Min;ZHAO Ping;ZHU Shi-Ying;QI Zhong-Tian

作者机构：第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海200433 

基　　金：军队"十一五"医学专项课题资助(No.06Z026)。~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2006年第22卷第5期

页      码：789-794页

摘      要：对20余种细菌16SrDNAs进行多序列比对与进化树分析,设计铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa,PA)荧光定量PCR(fluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)特异性引物。提取PA基因组DNA,以特异性引物扩增16SrDNA靶片段,并构建重组质粒pMDT-Pfr。将梯度稀释的pMDT-Pfr质粒作为模板,用于建立定量标准曲线。以SYBRGreenI荧光染料建立20μL反应体系,对不同浓度的PADNA样品进行FQ-PCR检测。同时,以金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、福氏志贺菌、变形杆菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和结核杆菌的基因组DNA作阴性对照,验证FQ-PCR方法检测PA的特异性。结果显示,设计的FQ-PCR引物的靶向序列,仅对PA16SrDNA有高度同源性;FQ-PCR方法检测PA,其灵敏度达3.6pg/μL的基因组DNA或(2.1×103±3.1×102)拷贝/μL的16SrDNA基因,并且具有很强的特异性;从细菌DNA提取到FQ-PCR检测,可在2h左右完成PA鉴定。较传统的培养鉴定法而言,以16SrDNA作为FQ-PCR靶基因快速检测PA,具有很好的研究价值与应用前景。

主 题 词：铜绿假单胞菌 16S rDNA 荧光定量PCR 检测 

学科分类：07[理学] 08[工学] 1010[医学-医学技术类] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 100215[100215] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-3061.2006.05.016

馆 藏 号：203470778...