大鼠CREB结合蛋白RNA干扰重组慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：杨简 江洪 陈思思 陈静 徐盛开 王继春 

作者机构：武汉大学人民医院心内科430060 武汉大学心血管病研究所 

基　　金：国家自然科学基金(30770849) 

出 版 物：《中华老年心脑血管病杂志》 (Chinese Journal of Geriatric Heart,Brain and Vessel Diseases)

年 卷 期：2010年第12卷第4期

页      码：348-350页

摘      要：目盼构建大鼠CREB结合蛋白（CREB binding protein，CBP）基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体，并观察该载体对大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）CBP表达的沉默效应。方法设计合成4条CBP基因的siRNA序列，将筛选确定的CBP RNAi有效靶序列与pFU—GW—iRNA载体连接产生CBPshRNA慢病毒表达载体，转化、PCR筛选阳性克隆及测序鉴定。脂质体2000将CBP shRNA慢病毒载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞，完成慢病毒颗粒包装及滴度测定。包装产生的重组慢病毒感染大鼠VSMCs，实时定量RT-PCR检测CBP mRNA的表达，并与未转染及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞进行比较。结果PCR扩增和测序结果证实，成功构建大鼠CBP shRNA慢病毒载体。经包装产生的慢病毒滴度为2×10^9TU／ml，与未转染慢病毒及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞比较，CBP shRNA慢病毒转染可使VsMcs的CBP mRNA分别下降88．5％和92．7％。结论成功构建CBP基因RNAi慢病毒表达载体．对VsMcs的CBP表达具有良好沉默作用，为后期基因治疗血管增殖性疾病奠定基础。

主 题 词：CREB结合蛋白质 RNA干扰 转染 基因疗法 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0126.2010.04.019

馆 藏 号：203472055...