PCBP1 RNAi重组慢病毒包装及筛选其稳定感染的神经细胞系

作     者：王兰英 霍丽蓉 Wang Lanying;Huo Lirong

作者机构：山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室太原030001 

基　　金：山西医科大学高校青年基金资助项目(02200805) 

出 版 物：《医学研究杂志》 (Journal of Medical Research)

年 卷 期：2012年第41卷第2期

页      码：42-45页

摘      要：目的 PCBP1是真核细胞内的一种桥梁蛋白,具有多种生物学功能。本研究以慢病毒质粒构建PCBP1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体,并筛选其稳定感染的神经细胞系,为进一步通过该载体系统探讨PCBP1的具体功能提供有力手段。方法设计合成针对人及小鼠的PCBP1基因的siRNA茎环结构的正反义序列,退火形成双链,与pLenti-Lox3.7载体的双酶切产物连接,以质粒PCR、酶切和DNA测序等方法,对重组克隆进行鉴定以确认目的片段的插入。之后,采用脂质体转染,将慢病毒载体系统的核心载体pLentiLox3.7和包装质粒共转染293T细胞,收获病毒颗粒,分别感染SH-SY5Y细胞,再通过流式分选获得感染不同病毒颗粒的细胞,提取RNA检测PCBP1 mRNA水平。结果检测结果显示PCBP1 siRNA茎环结构序列正确插入pLentiLox3.7载体,并且成功构建PCBP1基因敲低的神经细胞系。结论 PCBP1基因siRNA表达载体及其基因敲低稳定细胞系的成功构建,为进一步研究该基因在相应细胞中的功能奠定了基础。

主 题 词：PCBP1 RNA干扰 慢病毒载体 神经细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-548X.2012.02.013

馆 藏 号：203473033...