中华补血草ISSR-PCR体系的构建与正交优化

作     者：丁鸽 张代臻 于延球 赵玲玲 张蓓蓓 Ding Ge;Zhang Daizhen;Yu Yanqiu;Zhao Lingling;Zhang Beibei

作者机构：盐城工学院化学与生物工程学院江苏盐城224003 江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室盐城师范学院江苏盐城224002 

基　　金：国家自然科学基金(31000142) 江苏省自然科学基金(BK2011421) 盐城工学院科研项目基金 盐城工学院博士启动基金(XKR2010003) 

出 版 物：《南京师大学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Normal University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2012年第35卷第3期

页      码：93-97页

摘      要：为获得中华补血草ISSR的最佳反应体系,采用正交试验设计,对影响ISSR反应的模板含量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度、扩增程序及退火温度等多种因子进行优化筛选.通过各因子的组合研究,分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立了可用于中华补血ISSR-PCR分析的稳定可靠的反应体系:25μLPCR反应体积,10×Buffer 2.5μL,2 mmol/L MgCl2,dNTP 100μmol/L,模板DNA为20 ng,Taq聚合酶1.5 U,随机引物0.4μmol/L,退火温度52℃～58℃.所建立的中华补血草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于中华补血草的遗传多样性及物种保护的研究.

主 题 词：中华补血草 ISSR 反应体系 正交优化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071001[071001] 07[理学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-4616.2012.03.017

馆 藏 号：203473296...