芍药肌动蛋白基因组DNA的克隆及分析

作     者：范丙友 张文婷 徐杰 骞光耀 高水平 郭丽丽 侯小改 FAN Bing-you;ZHANG Wen-ting;XU Jie;QIAN Guang-yao;GAO Shui-ping;GUO Li-li;HOU Xiao-gai

作者机构：河南科技大学农学院河南省高校牡丹工程技术中心河南洛阳471003 河南科技大学林学院河南洛阳471003 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(U1204323) 河南省科技厅国际合作项目(134300510052) 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2014年第45卷第14期

页      码：2069-2074页

摘      要：目的克隆芍药Paeonia lactiflora肌动蛋白(Actin)基因组DNA序列并解析基因结构,分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况。方法根据本课题组报道的芍药Actin基因cDNA序列(JX310002)设计特异性引物,以芍药栽培品种"桃花飞雪"总DNA为模板,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增芍药Actin基因组基因,克隆PCR产物并进行测序。应用生物信息学软件预测芍药Actin基因的外显子及内含子,基于Blastn程序分析芍药Actin基因在核苷酸水平上的同源性,应用MEGA5.0软件构建分子系统进化树;设计跨越内含子的半定量RT-PCR扩增引物,分析芍药Actin基因在芍药根、茎、叶、花中的表达情况。结果测序结果表明芍药Actin基因组DNA序列全长1 405 bp,含4个外显子和3个内含子,3个内含子中共6个剪接位点均遵循高等真核生物5’端供位GU与3’端受位AG模式;共编码377个氨基酸,GenBank登录号为KF363830。设计了一对半定量RT-PCR扩增引物,其中上游引物跨越了芍药Actin基因的第1个内含子,可有效防止由DNA污染而造成RT-PCR扩增的假阳性;半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花等不同组织中的表达量保持恒定。结论首次克隆了芍药Actin基因组DNA序列并明确了其基因结构,半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因可以作为芍药功能基因表达分析的内标基因。

主 题 词：芍药 肌动蛋白 基因组DNA 克隆 基因结构 表达分析 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7501/j.issn.0253-2670.2014.14.021

馆 藏 号：203474204...