环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测扁浒苔(Ulva compressa)的研究

作     者：陈先锋 周前进 王瑞娜 段维军 苗亮 陈炯 CHEN Xian-Feng;ZHOU Qian-Jin;WANG Rui-Na;DUAN Wei-Jun;MIAO Liang;CHEN Jiong

作者机构：宁波大学海洋学院宁波315211 宁波检验检疫科学技术研究院宁波315012 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划) 2012AA092001号 浙江省重大科技专项重点社会发展项目 2013C03045-1号 

出 版 物：《海洋与湖沼》 (Oceanologia Et Limnologia Sinica)

年 卷 期：2015年第46卷第4期

页      码：819-827页

摘      要：本研究将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)的可视化检测方法结合,建立了扁浒苔(Ulva compressa)的LAMPLFD快速检测技术。该方法以扁浒苔的内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)序列为检测靶标,设计了3对特异性引物(其中,上游内引物由生物素标记)和1条异硫氰酸荧光素标记的探针。结果表明,LAMP最适反应温度为63°C,扩增时间为60 min,从核酸扩增到LFD结果判读需70 min。利用LAMP-LFD可特异性检出扁浒苔,对浒苔、曲浒苔、缘管浒苔和孔石莼等石莼属绿藻以及塔玛亚历山大藻、无纹环沟藻、东海原甲藻、锥状斯克里普藻和赤潮异弯藻等常见微藻的检测结果为阴性。该方法最低可检测到0.1 pg的扁浒苔基因组DNA,是以Uco ITS-F3和Uco ITS-B3为特异性引物的PCR方法的100倍。对实际样品的检测结果表明,LAMP-LFD方法检测扁浒苔与传统的形态学观察的结果一致。因此,该方法可快速、特异地检测出扁浒苔,而且操作简单,仪器设备依赖性低,有潜力成为扁浒苔现场检测的常规技术手段。

主 题 词：扁浒苔 环介导等温扩增 横向流动试纸条 内转录间隔区 检测 

学科分类：07[理学] 0713[0713] 

核心收录：

D　O　I：10.11693/hyhz20150200048

馆 藏 号：203474625...