实时荧光定量PCR检测鸟苷酰环化酶C基因表达方法的建立

作     者：毛振彪 张冬雷 黄介飞 王唯一 鞠少卿 MAO Zhenbiao;ZHANG Donglei;HUANG Jiefei;WANG Weiyi;JU Shaoqing

作者机构：南通大学附属医院消化内科江苏南通226001 南通大学附属医院检验医学中心江苏南通226001 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2006年第24卷第3期

页      码：176-178页

摘      要：目的建立实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测鸟苷酰环化酶C(GC-C)基因表达的方法。方法在GC-C基因高保守区设计了特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中GC-C mRNA含量,并以GC-C mRNA和β2M mRNA含量的比值作为评价GC-C表达水平的指标。结果本法检测GC-C mRNA含量的线性范围为101pg／ml-109pg／ml,样本批内和批间CV值分别为6．87％一11．12％和8．86％- 15．19％。30例健康献血员和11例大肠良性病变患者的外周血单个核细胞(PBMC)中均未检出GC-C mRNA表达,大肠癌患者PBMC的GC-C mRNA检出率为83．8％(31／37),表达水平为0．88±0．06。10例大肠癌组织和T84细胞株均检出GC-C mRNA,表达水平分别为每μg组织(0．86±0．07)和每个细胞0．0082。结论成功建立RFQ-PCR检测GC-C mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度、特异性和可重复性。

主 题 词：鸟苷酰环化酶C 外周血单个核细胞 实时荧光定量 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-764X.2006.03.006

馆 藏 号：203479878...