SELEX技术筛选HCV非结构蛋白NS3的DNA适配子

作     者：徐国胜 骆晓枫 黄小荣 林昌盛 谢金卫 周俊宜 XU Guo-sheng;LUO Xiao-feng;HUANG Xiao-rong;LIN Chang-sheng;XIE Jin-wei;ZHOU Jun-yi

作者机构：中山大学中山医学院广东广州510080 广州血液中心广东广州510095 

基　　金：广东省科技计划项目(2010B031200013) 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2015年第15卷第5期

页      码：600-602,609页

摘      要：目的用配基指数富集的系统进化技术(SELEX)技术筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的DNA适配子。方法构建随机ss DNA文库,两端为固定序列,中间为39 nt的随机序列,总长度为85 nt,将NS3蛋白包被在96孔板上,ss DNA与NS3蛋白进行亲和反应,洗去未结合的ss DNA,洗脱回收与NS3蛋白结合的DNA,PCR扩增后,磁珠法分离成单链。重复以上筛选步骤,直至筛选出高特异性和亲和力的核酸适配子。将核酸适配子连接质粒载体克隆转入大肠杆菌,挑选阳性克隆提取质粒外送到公司进行测序。结果通过8轮筛选,成功筛选出DNA适配子,并获得其中6条克隆的DNA一级序列。6条适配子序列长度相同,均为85 nt,两端固定序列与设计相符,中间为随机序列,随机序列无共同保守系列。所有寡核苷酸适配子的二级结构以茎环和凸环为主。结论以NS3蛋白作为药物研究的靶点,结合SELEX筛选技术研究其核酸适配子,具有巨大的潜力和研究价值。

主 题 词：配基指数富集的系统进化技术 丙型肝炎病毒 NS3蛋白 适配子 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

馆 藏 号：203480252...