基因重组降钙素原蛋白在大肠杆菌中的克隆表达及纯化

作     者：陈洁 张志萍 谢惠芳 CHEN fie;ZHANG Zhiping;XIE Huifang

作者机构：上海第二军医大学附属长征医院闸北分院检验科上海200070 

基　　金：上海市闸北区卫生局科研基金(2003) 

出 版 物：《检验医学》 (Laboratory Medicine)

年 卷 期：2008年第23卷第3期

页      码：240-244页

摘      要：目的构建降钙素原(PCT)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度的PCT蛋白。方法按人的全长PCTcDNA序列,设计引物用标准的聚合酶链反应(PCR)法全基因合成步骤合成扣除信号肽外PCT的片段,应用基因重组技术将该片段克隆到质粒pET21a(+)中,进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定。将重组质粒转化大肠杆菌***(DH5α),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,用镍-氮三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化获取蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)的方法鉴定。结果扩增出的人PCT片段于原核表达载体中克隆,经酶切和核酸测序鉴定,得到正确的重组质粒pET-PCT,并在大肠杆菌中得以表达。纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带;用抗PCT的抗体进行Western blot分析证明目的蛋白有反应性。结论本研究成功构建了表达基因重组人PCT的原核表达载体,基因重组人PCT蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,为进一步获取高纯度、高效价的单克隆抗体和开展临床检测提供了必要的条件。

主 题 词：降钙素原 克隆表达 纯化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-8640.2008.03.011

馆 藏 号：203480392...