有效抑制小胶质细胞上TLR4表达的siRNA筛选及转染复合物细胞毒性的检测

作     者：刘思兰 杨建平 王丽娜 刘磊 李彩芳 任春光 周静 李伟 江淼 马珍妮 邱桥成 LIU Si-lan;YANG Jian-ping;WANG Li-na;LIU Lei;LI Cai-fang;REN Chun-guang;ZHOU Jing;LI Wei;JIANG Miao;MA Zhen-ni;QIU Qiao-cheng

作者机构：苏州大学附属第一医院麻醉科江苏苏州215006 

基　　金：国家自然科学基金资助课题(No30872442) 江苏省卫生厅基金资助课题(NoH200855) 江苏省卫生厅重点基金资助课题(NoK200518) 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2010年第26卷第4期

页      码：457-465页

摘      要：目的筛选有效抑制小胶质细胞上TLR4(Toll-like receptor 4)表达的小干扰RNA(simall interference RNA,siR-NA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR4的siRNA4条(siRNA312,siRNA439,siRNA1495,siRNA2062)及1条与TLR4基因无同源性的带绿色荧光标记的阴性对照siRNA:在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。用RT-PCR方法测定干扰后小胶质细胞上TLR4mRNA表达,Western blot方法测定干扰后TLR4蛋白表达,比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA。采用MTT法检测转染复合物的细胞毒性。结果①siRNA(40nmol·L-1)和LipofectamineTM 2000(1μl)有较高的转染效率;②与阴性对照组相比,TLR4 siRNA(40nmol·L-1)干扰小胶质细胞24h后TLR4 mRNA的相对表达量降低,分别为:85%(siRNA439)、73%(siRNA312)、67%(siRNA1495)和33%(siRNA2062)。③siRNA439干扰小胶质细胞48h后TLR4蛋白表达最低(P<0.01)。④LipofectamineTM 20001μl复合低于40nmol·L-1的siRNA的各组细胞存活率均在85%以上。结论①siRNA439对小胶质细胞上TLR4表达的抑制效果最大。②siRNA浓度40nmol·L-1,LipofectamineTM 2000浓度1μl,细胞毒性很低,适合转染。

主 题 词：小胶质细胞 Toll-like receptor 4 小干扰RNA 筛选 转染复合物 细胞毒性 

学科分类：1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100101[100101] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203481072...