蚯蚓金属硫蛋白定量PCR检测方法及其分子诊断

作     者：陈春 周启星 CHEN Chun;ZHOU Qi-xing

作者机构：南开大学环境科学与工程学院环境污染过程与基准教育部重点实验室天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室天津300071 农业部环境保护科研监测所天津300191 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(21037002) 国家环保公益性项目(201009032) 

出 版 物：《中国环境科学》 (China Environmental Science)

年 卷 期：2011年第31卷第8期

页      码：1377-1382页

摘      要：根据GenBank中蚯蚓(Eisenia fetida)金属硫蛋白(MT)基因序列设计合成引物,采用RT-PCR扩增出目的基因片段,将目的基因片段插入pEASY-Blunt中制备质粒标准品.通过不同梯度稀释倍数的质粒标准品,建立了目的基因MT与内参基因β-actin的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法.通过土壤染毒培养实验,将蚯蚓分别暴露于50,500,1000mg/kg重金属Cd染毒的自然土壤中培养14,28d,研究蚯蚓体内MT mRNA转录水平的表达变化.结果表明,重组质粒测序后显示目的片段序列同源性好,证明所设计的MT、β-actin引物能成功用于蚯蚓MT mRNA的检测.两基因构建的荧光定量标准曲线线性关系分别为0.994,0.999,且PCR扩增效率也皆接近于100%.染毒实验发现,Cd可诱导蚯蚓体内MT mRNA的表达,其表达水平与Cd污染暴露呈现出剂量-效应和时间-效应关系,表明蚯蚓MT基因可作为潜在分子标志物,诊断环境中Cd污染及其暴露水平.

主 题 词：金属硫蛋白 蚯蚓 荧光定量RT-PCR 镉 分子标志物 

学科分类：0830[工学-生物工程类] 07[理学] 09[农学] 0903[农学-动物生产类] 0713[0713] 

核心收录：

D　O　I：10.0000/j.zghjkx.1000-6923.20113112223

馆 藏 号：203481350...