多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究

作     者：刘志国 罗成旺 张利 姜海 赵鸿雁 朴东日 田国忠 崔步云 LIU Zhi-guo;LUO Cheng-wang;ZHANG Li;JIANG Hai;ZHAO Hong-yan;PIAO Dong-ri;TIAN Guo-zhong;CUI Bu-yun

作者机构：内蒙古乌兰察布市地方病防治中心乌兰察布012000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 内蒙古农业大学呼和浩特010018 

基　　金：国家重大专项课题(No.2008ZX10004-007) 国家科技重大传染病应急处置检测技术平台(No.2011ZX10004-001) 科技部973项目(No.2010CB530201)~~ 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2012年第28卷第9期

页      码：869-874页

摘      要：目的利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法。方法根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度。利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性。通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证。结果应用多重Taq-Man荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR最低检测下限均约为102copy/μL(13～24fg/μL),是常规PCR灵敏度的100倍。结论建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌。

主 题 词：布鲁氏菌 荧光定量聚合酶链式反应 鉴定 评价 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.09.002

馆 藏 号：203484965...