线虫抗凝血蛋白AcaNAP7基因克隆、表达及抗凝活性鉴定

作     者：彭礼飞 杨陈 王会兰 吴亚敏 邓莉 吴铁 胡晶晶 PENG Li-fei;YANG Chen;WANG Hui-lan;WU Ya-min;DENG Li;WU Tie;HU Jing-jing

作者机构：广东医学院寄生虫学教研室广东湛江524023 广东医学院药理学教研室广东湛江524023 

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(No04011381) 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2007年第23卷第3期

页      码：337-341页

摘      要：目的在大肠杆菌中表达犬钩虫线虫抗凝血蛋白NAP7(AcaNAP7)成熟蛋白,并鉴定表达产物的抗凝活性。方法根据AcaNAP7的核苷酸序列设计引物,从克隆质粒pUCm-T/AcaNAP7中扩增编码AcaNAP7成熟蛋白的基因;扩增产物经双酶切定向克隆到原核表达载体PET-32a中;构建的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达;表达产物经镍琼脂糖凝胶FF纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化的部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝血活性。结果克隆了编码AcaNAP7成熟蛋白的基因并构建了重组表达质粒pET-32a/AcaNAP7;在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达了融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白,产物主要以可溶形式存在;镍琼脂糖凝胶亲和纯化获得了纯度高达92%的目的蛋白;纯化产物能明显延长PT及aPTT,其延长PT比延长aPTT更有效。结论在大肠杆菌中成功表达了AcaNAP7融合蛋白,表达产物具有抗凝活性。该实验为进一步研究AcaNAP7的功能及应用奠定了基础。

主 题 词：线虫抗凝血蛋白 AcaNAP7 克隆 表达 抗凝活性 

学科分类：1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1001-1978.2007.03.013

馆 藏 号：203486233...