截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定

作     者：田江红 雷迎峰 尹文 陈任安 汪桦 吕欣 杨敬 孙梦宁 姚敏 徐志凯 

作者机构：第四军医大学基础部微生物学教研室西安710032 

基　　金：国家自然科学基金项目(30600564 30670100 30700710 3070030)资助 

出 版 物：《科学技术与工程》 (Science Technology and Engineering)

年 卷 期：2010年第10卷第4期

页      码：863-867页

摘      要：为构建HCV截短型ns5bΔ21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体。运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5bΔ21基因;克隆入原核表达载体pRSETA。将重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21转化BL21大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清。说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体。

主 题 词：HCV NS5B RNA聚合酶 大肠杆菌 蛋白表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-1815.2010.04.004

馆 藏 号：203487345...