苦荞SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

作     者：王耀文 夏楠 韩瑞霞 李艳琴 王安虎 蔡光泽 WANG Yao-wen;XIA Nan;HAN Rui-xia;LI Yan-qin;WANG An-hu;CAI Guang-ze

作者机构：山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西太原030006 西昌学院四川西昌615013 

基　　金：国家自然科学基金资助项目"苦荞遗传连锁图谱构建及品种资源分析"(30771310) 

出 版 物：《贵州农业科学》 (Guizhou Agricultural Sciences)

年 卷 期：2011年第39卷第4期

页      码：4-8页

摘      要：为了保证SSR-PCR的重复性,快速找到最优的水平组合,采用交互正交设计L27(313)对苦荞SSR-PCR反应体系进行了5因素(Mg2+、dNTP、Taq酶、模板DNA和引物)3水平优化试验,并对148对SSR引物进行了筛选。结果表明:5个单因素和2个交互作用(Mg2+×dNTP、Mg2+×Taq酶)对苦荞SSR-PCR均有极显著影响;最佳反应体系为:20μL总体积,Mg2+1 mmol/L,dNTP 0.3 mmol/L,Taq酶1.5 U,模板DNA30 ng,引物0.25μmol/L,10×buffer 2μL。运用该体系对7份苦荞材料进行扩增,电泳结果显示,扩增条带清晰,重复性好。利用148对SSR引物对滇宁一号、九江苦荞、野苦荞进行扩增,选出具有多态性的引物26对,可用于苦荞遗传多样性分析及遗传图谱构建。

主 题 词：苦荞 SSR-PCR 交互正交设计 引物筛选 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-3601.2011.04.002

馆 藏 号：203487842...