细胞内p53蛋白LC-MS/MS定量方法及其应用

作     者：李盈淳 汤志远 吴梦秋 王广基 郝海平 LI Ying-chun;TANG Zhi-yuan;WU Meng-qiu;WANG Guang-ji;HAO Hai-ping

作者机构：中国药科大学药物代谢动力学重点实验室南京210009 

基　　金：国家"重大新药创新"科技重大专项资助项目(No.2009ZX09304-001) 

出 版 物：《中国药科大学学报》 (Journal of China Pharmaceutical University)

年 卷 期：2012年第43卷第6期

页      码：519-525页

摘      要：建立细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法,应用该定量方法测定放线菌素D作用下细胞中p53表达量的变化。采用免疫沉淀法提取细胞样品中的p53蛋白,对提取后的样品进行酶解,基于肽图分析选择特异性肽段VEY-LDDR(m/z 455.22+-681.21+)作为定量肽段,设计合成肽段VEYIEDR(m/z 462.12+-695.21+)作为内标肽段,建立该肽段的LC-MS/MS定量方法,通过该肽段表征p53蛋白的量;应用该质谱定量方法对放线菌素D给药后的HCT116细胞中的p53蛋白的表达量进行测定。p53蛋白质谱定量方法学考证表明,方法的线性良好(R2=0.999 3),范围2.2～112.3 pmol/mL;专属性好,基质中无干扰成分,批内批间精密度及稳定性均符合生物样品的测定要求;放线菌素D给药后细胞中p53蛋白的表达量呈给药浓度与给药时间依赖性增加。建立的细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法可以准确的测定细胞内的p53蛋白表达量。

主 题 词：p53 LC-MS MS 放线菌素D 定量 

学科分类：1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100706[100706] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203488686...