筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1表达的小干扰RNA及其毒性检测

作     者：刘华 跃嵇富海 王秀云 左剑玲 许期年 LIU Hua-yue;JI Fu-hai;WANG Xiu-yun;ZUO Jian-ling;XU Qi-nian

作者机构：苏州大学附属第一医院麻醉科215006 苏州大学附属第一医院脑神经研究室 

基　　金：江苏省医学重点人才 六大人才高峰项目 苏州市科研基金资助(SYS201111) 

出 版 物：《国际麻醉学与复苏杂志》 (International Journal of Anesthesiology and Resuscitation)

年 卷 期：2013年第34卷第7期

页      码：595-599页

摘      要：目的筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1（Caveolin-1）表达的小干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）序列，并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计合成针对Caveolin-1的siRNA3条（siRNA422，siRNA548，siRNA710）及1条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在siRNAFect介导下转染血管内皮细胞。用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）测定转染后血管内皮细胞中Caveolin-1mRNA的表达，Westernblot方法测定干扰后Caveolin-1蛋白表达，比较抑制率，筛选出有效抑制Caveolin-1表达的siRNA。采用磺基罗丹明B法（sulforhodamineB，SRB）分析转染复合物的细胞毒性。结果①在siRNAFect相同剂量下，siRNA20、30nmol／L组或40nmol／L组转染效率均达到85％以上（P〈0．01）；②siRNAFect 1．3μl复合10nmol／L或20nmol／LsiRNA组细胞存活率均达到80％以上（P〈0．05）；③siRNA548对***926细胞Caveolin-1基因mRNA抑制效果最明显（P〈0．01）；④与阴性对照组及siRNA422、siRNA710相比较，siRNA548干扰血管内皮细胞48h后，Caveolin-1蛋白的表达量最低（P〈0．01o结论①siRNA548 对血管内皮细胞Caveolin-1表达的抑制效果最大。②siRNA浓度20nmol／L复合siRNAFect1．3μl转染效率高，细胞毒性低，适合转染。

主 题 词：血管内皮细胞 小窝蛋白-1 小干扰RNA 磺基罗丹明B法 细胞毒性 筛选 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-4378.2013.07.006

馆 藏 号：203488919...