pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达

作     者：李嘉杰 闻海兵 邹树峰 严剑 洪涛 Li Jiajie;Wen Haibing;Zou Shufeng;Yan Jian;Hong Tao

作者机构：南昌大学医学院研究生院330000 南昌大学第一附属医院神经外科330006 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2012年第41卷第9期

页      码：884-887页

摘      要：目的建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系。方法设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达Cx43的U251细胞中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性。采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平。结果酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞。结论构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础。

主 题 词：神经胶质瘤 转染 质粒 连接蛋白43 逆转录聚合酶链反应 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8348.2012.09.019

馆 藏 号：203494164...