利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素基因型特异性靶片段

作     者：李莹 杨春莉 赵莹 郭瑜琪 刘昌政 周晓红 LI Ying;YANG Chun-li;ZHAO Ying;GUO Yu-qi;LIU Chang-zheng;ZHOU Xiao-hong

作者机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东广州510515 南方医科大学南方医院检验科广东广州510515 

基　　金：广东省重大专项子课题(2006B33761002) 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2008年第28卷第8期

页      码：1382-1386,1390页

摘      要：目的利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素(BoNT)基因型特异性靶片段质粒、菌株。方法自GenBank获取BoNT基因序列,利用DNAMAN、Lasergene、Vector NTI等多种生物信息学分析软件和BLAST等网上数据分析平台进行综合分析,以锚定BoNT/B与BoNT/E基因中的型特异性靶片段,分别设计合成5条和10条DNA短链,经重叠PCR扩增获得完整的靶片段,纯化后连接到pMD18-T载体上,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,质粒提取后进行酶切和测序鉴定。结果分析了全球已报道的60条BoNT基因序列(A、B、E、F型),于BoNT/B与BoNT/E基因中,分别锚定了215bp和360bp的靶片段,并设计合成其特异的检测引物对,经酶切、测序确证,成功合成具有型特异性的BoNT/B与BoNT/E靶片段。结论获得含有型特异性BoNT/B与BoNT/E靶片段的重组质粒pMD18-T-BoNT/B,pMD18-T-BoNT/E及其菌株。

主 题 词：反向遗传学 肉毒神经毒素 克隆 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-4254.2008.08.010

馆 藏 号：203494343...