一种高效扩增人T细胞受体α链可变区基因方法的建立

作     者：王琳 叶海燕 李晓东 刘妍 范振平 张玲霞 徐东平 WANG Lin;YE Hai-yan;LI Xiao-dong;LIU Yan;FAN Zhen-ping;ZHANG Ling-xia;XU Dong-ping

作者机构：解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30771898) 军队"十一五"医药卫生科研杰出人才项目(06J024) 

出 版 物：《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2009年第34卷第2期

页      码：139-142页

摘      要：目的建立一种高效扩增人T细胞受体(TCR)α链可变区(Vα)基因的方法。方法根据TCR Vα32个亚家族的基因序列特点,设计扩增Vα基因的上游内、外引物各42条,并将上游内、外引物各分为5组简并引物。在恒定区(C区)设计下游内、外引物,测序引物以及扩增Cα基因的上游引物各1条。提取细胞RNA,用PolyA介导反转录后,采用巢式PCR扩增正常人外周血单个核细胞(PBMC)中CD8 T细胞TCR Vα的32个亚家族基因,以Jurkat T淋巴瘤细胞作为对照。用T-easy载体克隆RT-PCR产物,对克隆基因进行测序分析。结果从正常人CD8 T细胞中扩增到了所有TCR Vα亚家族基因,以10个Jurkat细胞所提取的RNA作为模板即可获得成功扩增。TCR Vα同一亚家族基因的同源性均大于75%,序列差异主要在CDR3高变区。结论建立了一种高效灵敏的TCR Vα编码基因扩增方法,为抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的TCR克隆和功能研究打下了良好基础。

主 题 词：T淋巴细胞 受体,抗原,T细胞 克隆,分子 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0577-7402.2009.02.005

馆 藏 号：203494917...