疼痛相关融合基因的构建及siRNA对其抑制作用的研究

作     者：陈娜 冯泽国 张砡 李冠华 王维 Chen N;Feng ZG;Zhang Y

作者机构：解放军总医院麻醉科北京100853 

基　　金：国家自然科学基金资助(30672028)~~ 

出 版 物：《军医进修学院学报》 (Academic Journal of Pla Postgraduate Medical School)

年 卷 期：2009年第30卷第3期

页      码：351-353页

摘      要：目的:通过构建用于RNAi筛选的模拟靶基因,筛选出起作用的siRNA,为进一步研究以Cav2.2e[37a]为靶标的基因治疗提供依据。方法:构建了EGFP-e37a/e37b融合基因,将其放入载体质粒中进行表达。按照siRNA的设计原则设计了四对siRNA(编码为I号、Ⅱ号、Ⅲ号、IV号),并将其放入质粒表达载体中,用siRNA表达载体与融合基因表达载体共转染BHK细胞进行了RNAi试验。用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测RNAi效果。结果:EGFP-e37a/e37b融合基因通过PCR、测序等方法鉴定为正确;在荧光显微镜下可见siRNAⅡ使细胞的荧光效率明显受到抑制,流式细胞术可见siRNAⅡ的RNAi效率在24h达到了90%左右,其余3条siRNA抑制作用不明显。结论:本研究将目的基因e37a与EGFP基因进行了融合构建,通过EGFP的绿色荧光效应显示目的靶基因在细胞内的表达,并观察到RNAi抑制效果,筛选出了有功能的siRNA。

主 题 词：siRNA RNAi 钙通道 N型 Cav2.2e[37a] 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 071007[071007] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203495138...