T-载体在聚合酶链反应扩增产物克隆中的应用

作     者：傅建新 王玲 白霞 王玮 奚晓东 陈子兴 阮长耿 

作者机构：苏州医学院附属第一医院江苏省血液研究所苏州215006 青岛医学院附属第二医院 

基　　金：国家自然科学基金! (39770 30 6 ) 江苏省自然科学基金! (BK9716 6 ) 江苏省卫生厅科研基金! (H970 3) 江苏省科委应用基础项目 

出 版 物：《苏州医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Suzhou)

年 卷 期：2000年第20卷第3期

页      码：221-223,230页

摘      要：目的　探讨克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增产物的简便方法。方法　用PCR方法分别特异性扩增Wilms瘤基因wt1和尿激酶受体 (UPAR)基因 ,并利用Taq聚合酶具有的延伸酶活性将扩增产物直接克隆入T -载体 ,EcoRⅠ酶切鉴定阳性重组子。结果　设计的引物可分别扩增wt1基因锌指区 (34 3bp)和UPAR基因编码区全长 (10 83bp) ;未经修饰的常规PCR和高保真PCR扩增产物可被直接克隆入pGEM -TEasy载体 ,其中正确重组率为 6 2 .5 %～ 87.5 % ;克隆的wt1基因和UPAR基因已被成功用于竞争性PCR或表达。结论　T -载体法是克隆PCR产物通用而有效的方法。

主 题 词：聚合酶链反应 T-载体 基因克隆 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-0399.2000.03.014

馆 藏 号：203496006...