pshRNA-DNMT1介导的胃癌AGS细胞凋亡的体内外研究

作     者：陈道荣 王丕龙 黄爱龙 张秉强 CHEN Dao-rong;WANG Pi-long;HUANG Ai-long;ZHANG Bing-qiang

作者机构：重庆医科大学附属第一医院消化内科400016 重庆医科大学病毒性肝炎研究所 

基　　金：国家自然科学基金项目资助(30300298) 重庆市科委自然科学基金项目(CSCT2005BB5311) 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2006年第86卷第22期

页      码：1534-1539页

摘      要：目的构建沉默DNMT1基因的重组体pshRNA-DNMT1,研究其体内外对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响。方法设计短发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸片断,克隆到载体pTZU6+1中,构建重组体pshRNA-DNMT1,转染胃癌细胞株AGS,用Western印迹检测DNMT1蛋白质水平变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法评估mRNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)动态监测活细胞数,电镜和原位末端标记技术(TUNEL)观察其体外的促凋亡作用。构建裸鼠胃癌模型,经pshRNA-DNMT1处理后观察瘤体大小,绘制生长曲线;用苏木素伊红(HE)染色法、电镜和TUNEL检测细胞凋亡,用增殖细胞核抗原(PCNA)法评价细胞的增殖能力。结果成功构建重组质粒pshRNA-DNMT1后,进行序列分析得到确证。pshRNA-DNMT1转染AGS细胞后24h出现DNMT1蛋白质表达量减少,抑制率为28·24%,48h为68·54%,72h为81·47%,重组质粒pshRNA-DNMT1对胃癌AGS细胞中DNMT1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24h抑制率为21·63%,48h为52·97%,72h为72·06%。转染后24、48和72h细胞数存活率为PBS组的79·49%、51·63%和39·16%。pshRNA-DNMT1能抑制肿瘤生长,呈一定的时间和剂量依赖性。结论重组质粒pshRNA-DNMT1能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内DNMT1基因的表达。在胃癌细胞株AGS的体内外实验中均能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

主 题 词：基因 胃肿瘤 脱噬作用 

学科分类：1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j:issn:0376-2491.2006.22.006

馆 藏 号：203496877...