人野生型survivin-1基因重组载体的构建及其在A549中的表达

作     者：刘彦兵 李简 刘桐林 LIU Yan-bing;LI Jian;LIU Tong-lin

作者机构：北京大学第一医院胸外科北京100034 

出 版 物：《中国现代医学杂志》 (China Journal of Modern Medicine)

年 卷 期：2007年第17卷第6期

页      码：683-685页

摘      要：目的克隆细胞凋亡抑制蛋白Survivin异构体之一Survivin-1(SVV-1)基因的编码序列,构建含SVV-1基因的真核细胞表达载体并在肺腺癌细胞系A549中高表达,为进一步研究该基因在肺腺癌发病中的作用奠定基础。方法根据已发表的SVV-1基因的核苷酸序列自行设计一对分别含有BamHⅠ和Xho l双酶切位点的survivin-1基因上下游引物,以A549细胞系抽提的RNA为模板进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用Bam HI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.0中,用限制性内切酶酶切重组质粒pcDNA30-SVV-1和DNA序列测定进行鉴定。用脂质体法将pcDNA3。0-SVV-1导入肺腺癌细胞系A549中,嘌呤霉素选择培养,经免疫组化法和western blot鉴定其表达。结果RT-PCR扩增出长448bp的特异性片段,经克隆至pcDNA3.0后酶切鉴定证实,并测序表明序列与Gen-Bank报道完全一致。pcDNA3.0-SVV-1在A549细胞中有稳定表达。结论成功克隆了SVV-1的编码序列,构建了其真核细胞表达载体pcDNA3.0-SVV-1,有助于对SVV-1基因在腺癌发生中的致瘤机制做进一步研究。

主 题 词：Survivin-1基因 基因克隆 真核表达载体 肺腺癌A549 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 071008[071008] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-8982.2007.06.012

馆 藏 号：203501660...