构建重组人CatSper1特异抗原原核表达载体

作     者：黄丹 潘善培 关艺青 禹艳红 HUANG Dan;PAN Shan-pei;GUAN Yi-qing;YU Yan-hong

作者机构：暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632 

基　　金：国家自然科学基金项目(30570683) 

出 版 物：《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 (Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition))

年 卷 期：2010年第31卷第2期

页      码：130-135页

摘      要：目的:构建重组人Catsper1特异抗原(含胞外区、钙选择孔区和破伤风类毒素通用T细胞表位TT580-599)原核表达载体并表达重组抗原。方法:设计引物,以RT-PCR法扩增人CatSper1的整个跨膜区DNA片段,利用重叠PCR方法合成重组人CatSper1特异抗原DNA片段,并插入到pET-21b和pET-21b-Trx(硫氧还蛋白)的原核表达载体。测序鉴定后转化工程菌株***21(DE3)进行诱导表达,并纯化表达的重组蛋白。用Tricine-SDS-PAGE和Western blotting分析重组蛋白的表达情况。结果:成功构建pET-21b-Catsper1特异抗原和pET-21b-Trx-Catsper1特异抗原原核表达载体,并在BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白。Tricine-SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明,已获得重组人CatSper1特异抗原包涵体和纯化的可溶重组Trx-Catsper1特异抗原。结论:成功在原核表达系统表达重组人Catsper1特异抗原。

主 题 词：CatSper1 精子 免疫避孕 重叠PCR 原核表达 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-9965.2010.02.006

馆 藏 号：203502852...