CXCR4靶向shRNA质粒载体的制备和体外鉴定

作     者：吴包金 江华 李文鹏 吴建明 张盈帆 丁伟 WU Bao-jin;JIANG Hua;LI Wen-peng;WU Jian-ming;ZHANG Ying-fan;DING Wei

作者机构：复旦大学附属华山医院整形外科上海200040 第二军医大学附属长征医院整形外科上海200003 浙江大学医学院附属第二医院整形外科浙江杭州31009 

基　　金：国家自然科学基金资助(30371472) 

出 版 物：《中国美容医学》 (Chinese Journal of Aesthetic Medicine)

年 卷 期：2010年第19卷第8期

页      码：1167-1170页

摘      要：目的:设计并构建CXCR4靶向shRNA质粒载体,转染黑色素瘤细胞株,验证shRNA对黑色素瘤CXCR4基因的沉默效应。方法:设计合成CXCR4特异性shRNA,将其插入pSilencer质粒载体,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染黑色素瘤MV3细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久性克隆。应用RT-PCR技术检测shRNA对黑色素瘤细胞内CXCR4 mRNA表达,应用Westernblot法检测CXCR4蛋白变化。结果:成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体及稳定抑制CXCR4表达的永久性细胞克隆。阳性克隆测序结果表明合成的寡核苷酸链序列插入正确。稳定转染CXCR4-shRNA的高转移性黑色素瘤细胞MV3的CXCR4 mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调。结论:脂质体介导shRNA体内表达法制备的CXCR4-shRNA在黑色素瘤细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,有望为转移性黑色素瘤的靶向基因治疗提供一条新途径。

主 题 词：黑色素瘤 趋化因子受体CXCR4 shRNA 质粒 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-6455.2010.08.028

馆 藏 号：203502982...