抗菌肽Defensin真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

作     者：许琴英 朱家勇 金小宝 徐建华 XU Qin-ying

作者机构：广东医学院寄生虫学与临床寄生虫检验学教研室广东省湛江市524023 广东药学院寄生虫学教研室 

基　　金：湛江市科技攻关计划项目(2007C07004) 

出 版 物：《中华生物医学工程杂志》 (Chinese Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2011年第17卷第6期

页      码：509-512页

摘      要：目的 构建家蝇幼虫抗菌肽的真核表达载体,并检测它在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达情况.方法 以pUCm-T/Defensin为模板,设计带His标签特异引物,扩增C-末端融合6×His标签的Defensin基因的cDNA全长编码区序列,将其克隆至pcDNA3.1（＋）真核表达载体.经酶切及测序鉴定后,以阳离子脂质体Lipofect AmineTM 2000转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定转染的阳性克隆细胞,以RT-PCR分析其mRNA的转录情况,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以Western免疫印迹鉴定蛋白质表达情况.结果 构建了pcDNA3.1 （＋）-Defensin-His表达质粒,建立了稳定转染的CHO细胞系.RT- PCR从阳性克隆CHO细胞系中扩增出320 bp大小的目的片段,从转录水平证实pcDNA3.1（＋）-Defensin-His重组细胞株表达了Defensin基因.Western免疫印迹检测可见相对分子质量为10000的阳性条带,表明Defensin-His在该细胞系中成功表达.结论 成功构建了质粒pcDNA3.1（＋）-Defensin-His,并获得了稳定表达的CHO-Defensin细胞株,有利于进一步研究家蝇幼虫抗菌肽Defensin基因的生物学功能.

主 题 词：抗菌肽类 基因表达 载体 真核细胞 中国仓鼠卵巢细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2011.06.007

馆 藏 号：203503794...