动物双歧杆菌肌球交叉反应抗原MCRA酶学功能的研究

作     者：杨波 陈海琴 宋元达 张灏 陈卫 

作者机构：江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 

基　　金：国家自然科学基金(21276108) "十一五"国家"863"计划(2007AA100402) "十二五"国家"863"计划(2011AA100905)资助项目 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2012年第32卷第12期

页      码：30-36页

摘      要：目的:将肌球蛋白交叉反应抗原基因(Myosin cross reactive antigen,MCRA)在毕赤酵母中重组表达,对其酶学功能进行研究。方法:利用动物双歧杆菌BB-12(Bifidobacterium *** BB-12)的肌球交叉反应抗原(MCRA)基因序列特征设计引物进行PCR扩增后克隆至毕赤酵母表达载体pPinkα-HC,电转化获得PichiaPinkTM重组菌。通过SDS-PAGE和Westernblot检测重组蛋白的表达情况,GC-MS分析重组菌的脂质组成情况,最终确定重组蛋白的活性及其催化特性。结果:SDS-PAGE及Western blot结果表明动物双歧杆菌BB-12的MCRA蛋白在重组毕赤酵母菌PichiaPinkTMpPinkα-HC-MCRA中成功表达且定位至细胞膜,大小为82 kDa。GC-MS结果显示,添加底物亚油酸培养基后,重组菌将亚油酸转变为羟基化衍生物,产物为10-羟基-顺-12-十八碳烯酸(10-HOE)。结论:这是首次对该类蛋白成功定位后对其酶学功能进行研究,动物双歧杆菌BB-12的MCRA基因首次在毕赤酵母中实现了活性表达,产物为10-羟基-顺-12-十八碳烯酸。

主 题 词：肌球蛋白交叉反应抗原 亚油酸 毕赤酵母表达系统 重组表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20121206

馆 藏 号：203504113...