β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的高效表达

作     者：唐卫华 王瑞明 肖静 李丕武 曲丽娜 孙红梅 杨亚威 

作者机构：山东轻工业学院食品与生物工程学院山东济南250353 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)项目("糖链修饰与糖衍生物的研制" 2012AA021504)资助 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2013年第23卷第2期

页      码：18-22页

摘      要：目的:构建高效表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母工程茵,研究重组菌的产酶水平。方法:从魔芋地土壤中筛选出1株高产β-甘露聚糖酶的菌株;生理生化鉴定及16S rDNA测序结果为芽孢杆菌,命名为Bacillus ***-1(GenBank登录号JX524224);以Bacillus ***-1基因组DNA为模板,克隆获得一段1 084 bp的β-甘露聚糖酶基因manW(GenBank登录号JX869490),其编码360个氨基酸,分子量40 kD,属糖苷水解酶家族26;SignalP4.0分析含一段25个氨基酸的信号肽,将优化设计的β-甘露聚糖酶基因序列插入表达栽体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-manW;BglⅠ酶切线性化后电转化Pichia pastorisGS115中。结果:经大量筛选,获得高效表达的茵株manW1,摇瓶发酵结果:该酶最适pH 6.5,最适温度37℃,具有良好的热稳定性和耐酸性,酶活达1 180 U/mL。结论:重组酶具有良好的应用前景。

主 题 词：β-甘露聚糖酶 高效表达 酶学性质 Bacillus sp QYW-1 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203504265...