BCSC-1基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

作     者：王洪伟 刘义帅 邸大琳 魏兵 吴国庆 鞠吉雨 WANG Hong-wei;LIU Yi-shuai;DI Da-lin;WEI Bing;WU Guo-qing;JU Ji-yu

作者机构：潍坊医学院免疫学教研室山东潍坊261053 

基　　金：山东省自然科学基金项目(课题编号:2009CM019) 

出 版 物：《潍坊医学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Weifang)

年 卷 期：2014年第36卷第1期

页      码：1-4页

摘      要：目的构建BCSC-1基因慢病毒RNA干扰载体并感染人乳腺癌细胞MCF-7,实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰效果。方法 设计并合成两条针对人BCSC-1基因的干扰序列(BCSC-1 shRNA1和BCSC-1shRNA2)以及对照序列(NS),将其连接入载体PLKO.1-sp6-pgk-GFP中,得到两个干扰载体和一个阴性对照载体。通过菌落PCR、双酶切和DNA序列测定等方法对其进行鉴定。将干扰载体与辅助包装质粒Lipofectamine2000共转染HEK293T细胞包装慢病毒并收取病毒上清。所获慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞MCF-7,QPCR方法检测两种干扰载体对BCSC-1基因的抑制效率。结果 菌落PCR结果显示目的片段插入PLKO.1-sp6-pgk-GFP载体,DNA测序证实插入序列无误。QPCR结果显示两种干扰载体感染人乳腺癌细胞MCF-7后,BCSC-1 shRNA1组和BCSC-1 shRNA2组BCSC-1基因表达水平分别为0.34±0.046和0.63±0.043,较空白对照组和NS组均有明显下降(P<0.05),且BCSC-1 shRNA1抑制效果优于BCSC-1 shRNA2(P<0.05)。结论 成功构建了两种BCSC-1基因慢病毒干扰载体,两载体均能下调人乳腺癌细胞MCF-7中BCSC-1基因表达水平。

主 题 词：慢病毒载体 BCSC-1 基因 MCF-7细胞 实时荧光定量PCR 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-3101.2014.01.001

馆 藏 号：203504641...