人参β-actin基因实时荧光定量PCR方法的建立

作     者：侯双利 韩梅 刘翠晶 杨利民 HOU Shuang-li;HAN Mei;LIU Cui-jing;YANG Li-min

作者机构：吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31270371) 国家科技支撑计划项目(2011 BA I03B01-02) 吉林省科技成果转化项目(20125068) 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2014年第45卷第17期

页      码：2530-2533页

摘      要：目的建立人参β-actin基因实时荧光定量PCR的方法。方法根据GenBank上其他高等植物β-actin基因保守区域设计一对特异性引物,将从人参中PCR扩增得到的β-actin基因克隆到pMD20-T载体上构建重组质粒,经1/10梯度稀释后用于制定标准曲线,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。结果该方法检测β-actin基因的最低拷贝数为43拷贝/μL,在较广的范围内（43~4.3×107拷贝/μL）有良好的线性关系（R2=0.995 3）;熔解曲线分析显示扩增产物为特异性单峰,其Tm值为（84.51±0.01）℃;5个不同浓度对照品组内试验变异系数为0.58%~2.79%,组间试验变异系数为2.61%~4.41%。结论该方法具有快速、灵敏、特异、高通量及重复性强等优点,为β-actin基因作为内参基因进行人参功能基因表达的定量分析提供了方法学基础。

主 题 词：人参 内参基因 基因克隆 实时荧光定量PCR SYBR Green I 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1008[医学-中药学类] 1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 1005[医学-中医学类] 1002[医学-临床医学类] 0703[理学-化学类] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7501/j.issn.0253-2670.2014.17.020

馆 藏 号：203505053...