雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响

作     者：杜佩云 程龙 姜丽娜 陈立涵 林佳佳 叶棋浓 苏金为 DU Pei-Yun;CHENG Long;JIANG Li-Na;CHEN Li-Han;LIN Jia-Jia;YE Qi-Nong;SU Jin-Wei

作者机构：福建农林大学生命科学学院福建福州350002 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

基　　金：国家自然科学基金(31200565) 北京市自然科学基金(5132027) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2015年第26卷第3期

页      码：325-328页

摘      要：目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据sh RNA设计原则设计并化学合成特异的sh RNA序列,经退火处理后与p SIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DH5α后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和q RT-PCR检测ERα在m RNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量。结果:经测序分析表明目标sh RNA序列成功插入载体,q RT-PCR检测稳定克隆,发现该sh RNA能有效抑制目的基因的m RNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制。结论:设计并构建的抑制ERα的sh RNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础。

主 题 词：雌激素受体α 肿瘤干细胞 短发夹RNA 流式细胞术 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2015.03.005

馆 藏 号：203505315...