应用人工转录因子技术抑制乙型肝炎病毒复制

作     者：李中堂 罗伟 付愚 蒋清虎 刘济铭 吴忠均 LI Zhongtang;LUO Wei;FU Yu;JIANG Qinghu;LIU Jiming;WU Zhongjun

作者机构：重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆400016 

基　　金：国家自然科学基金(81171562) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2015年第31卷第10期

页      码：1322-1326,1331页

摘      要：目的设计与构建特异性结合乙型肝炎病毒增强子1(HBV Enh1)的锌指蛋白人工转录因子(ZFP-ATF),检测在Hep G2.2.15细胞内的表达、对细胞生长影响及观察其抑制HBV DNA复制与表达的作用。方法构建含结合结构域ZFP与抑制性效应结构域Krüppel相关盒(KRAB)的人工转录因子(ATF),进行相关修饰、优化后,将人工合成ATF核酸序列插入真核表达质粒载体pc DNA3.1(^+),测序鉴定其正确性,X-treme GENE HP转染Hep G2.2.15细胞,共聚焦显微镜下观察ATF蛋白表达情况,CCK-8法检测ATF对细胞生长的影响,ATF转染24、48、72 h后,采用实时定量PCR、ELISA、Western blot法检测对HBV DNA复制与表达的抑制作用。结果成功构建pc DNA3.1-ATF(nls-ZFP-KRAB-FLAG)真核表达载体,ATF在Hep G2.2.15细胞中能正常表达,且对细胞生长无明显的影响,ATF具有抑制HBV DNA复制与表达的作用,在转染72 h后抑制作用达最高,抑制率达68.0%。结论构建的ATF在Hep G2.2.15细胞中能够正常表达且无毒性作用,可特异性结合HBV Enh1靶序列并具有抑制HBV DNA复制与表达的作用。

主 题 词：锌指蛋白 人工转录因子 乙型肝炎病毒 增强子 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.007518

馆 藏 号：203505431...