人CTLA4胞外区突变体在毕赤酵母中的高效表达

作     者：易绍萱 吴军 贺伟峰 代飞 陈希炜 张小容 

作者机构：第三军医大学附属西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植基础研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400038 

基　　金：国家自然科学基金资助重大项目(39993430-2) 重庆市科委攻关项目(2000)~~ 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2003年第25卷第21期

页      码：1902-1905页

摘      要：目的 根据毕赤酵母密码子偏好,设计并改造人CTLA4胞外区cDNA,构建毕赤酵母分泌型表达载体,以实现人CTLA4胞外区蛋白在毕赤酵母中的高效表达。方法利用PCR定点突变技术,将人CTLA4胞外区cDNA中的毕赤酵母低频使用密码子突变成高频使用密码子而不改变其氨基酸序列;经DNA序列测定证实后插入毕赤酵母高拷贝表达载体pPIC9K a分泌信号下游,SacⅠ线性化后电转GS115;G418梯度筛选转化菌;PCR鉴定目的基因整合;甲醇诱导表达,SDS-PAGE、Western blotting、肽质量指纹等鉴定表达蛋白。结果成功地对人CTLA4胞外区cDNA进行了定点突变,该突变体在毕赤酵母中能成功表达CTLA4胞外区蛋白。结论 为高效表达人CTLA4胞外区蛋白及其功能研究和临床应用奠定了基础。

主 题 词：CTLA4 PCR定点突变 毕赤酵母 分泌表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-5404.2003.21.009

馆 藏 号：203509659...