狂犬病毒G蛋白基因的克隆、表达及生物学活性鉴定

作     者：冯晓敏 卞颖华 徐伟 刘新建 朱进 管晓虹 

作者机构：南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室病理学系江苏南京210029 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室生物技术系江苏南京210029 南京医科大学第二附属医院消化内科江苏南京210011 

基　　金：国家"863"计划资助(2007AA02Z418) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2011年第31卷第7期

页      码：986-990页

摘      要：目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus Gprotein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原。方法:根据GenBank发表的狂犬病病毒CVS-11株G蛋白结构基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增出RVG基因片段,并定向克隆于pGEX-6P-1载体中,构建原核表达载体pGEX-RVG。阳性重组质粒转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过对表达条件的优化,确定可溶性表达的最佳条件。利用谷胱甘肽转移酶(GST)亲和层析法获得纯化的目的蛋白,Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:构建了原核表达载体pGEX-RVG,经IPTG诱导后可表达分子量约36 000融合蛋白,经纯化获得高纯度的目的蛋白。Western blot检测表明重组的融合蛋白有较好的生物学活性。结论:成功表达并纯化狂犬病毒G蛋白,为进一步研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供抗原。

主 题 词：狂犬病毒 G蛋白基因 融合蛋白 可溶性表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203510839...