siRNA表达载体对大鼠心肌H9c2细胞牛磺酸合成限速酶-CSD基因表达的抑制作用

作     者：杨群辉 杨硕 冯颖 吕秋凤 杨建成 胡建民 

作者机构：沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 

出 版 物：《营养学报》 (Acta Nutrimenta Sinica)

年 卷 期：2012年第34卷第4期

页      码：317-321页

摘      要：目的研究siRNA对大鼠心肌半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)的抑制作用。方法根据已克隆的大鼠心肌CSD基因序列(EU786150)设计并构建了4个siRNAs及1个阴性对照siRNA表达质粒,利用脂质体LipofectamineTM2000将构建好的重组质粒siRNA1#、siRNA2#、siRNA3#、siRNA4#及阴性对照质粒分别转染H9c2细胞,应用荧光显微镜观察转染效率、四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞增殖情况、实时荧光定量PCR和Western-blot检测CSD mRNA和蛋白表达。结果荧光显微镜观察细胞转染效率达70%左右;与阴性对照组、未转染组比较,siRNA1#重组质粒显著抑制了H9c2细胞中CSD mRNA和蛋白的表达(P0.05);MTT检测结果表明转染重组质粒siRNA1#、siRNA2#进入H9c2细胞48 h、72 h后细胞增殖明显受抑制,与阴性对照组、未转染组相比差异均达到显著水平(P<0.05)。结论 siRNA1#重组质粒能有效抑制CSD基因的表达,且显著抑制H9c2细胞增殖,为研究CSD基因及揭示牛磺酸在心肌细胞代谢中的作用奠定基础。[营养学报,2012,34(4):317-321]

主 题 词：H9c2细胞 RNA干扰 半胱亚磺酸脱羧酶 细胞增殖 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13325/j.cnki.acta.nutr.sin.2012.04.022

馆 藏 号：203512012...