基于16S rDNAs的快速检测血液细菌污染的荧光定量PCR研究

作     者：王永智 薛利军 任浩 赵平 朱诗应 李冕 戚中田 

作者机构：第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海200433 

基　　金：军队"十一五"医药卫生科研基金(06Z026 06Z027) 

出 版 物：《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Infectious Diseases(Electronic Edition))

年 卷 期：2007年第1卷第4期

页      码：203-209页

摘      要：目的探讨快速筛选血液及血液制品中细菌污染的方法。方法对20余种常见致病性细菌的16SrDNAs进行多序列比对,设计扩增细菌16SrDNAs基因的荧光定量PCR(FQ-PCR)通用引物。以12种致病菌、2种真菌、1种支原体、1种病毒和人基因组DNA为模板,验证通用引物检测细菌的特异性。通用引物扩增金黄色葡萄球菌16SrDNA靶片段,构建标准质粒pMDT-Bfr,并建立FQ-PCR定量标准曲线。分别以金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌作为革兰阳性和革兰阴性细菌代表菌,以其不同浓度的DNA为模板进行FQ-PCR反应,检验该方法的敏感性。抽提梯度稀释的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌模拟血液细菌污染标本的总DNA作为FQ-PCR反应模板,检验基于16SrDNAs的FQ-PCR作为血液细菌污染检测方法的敏感性。结果设计的FQ-PCR通用引物有较高的特异性,仅能检测出细菌的16SrDNAs;用该方法检测革兰阳性和革兰阴性菌,对于浓度在103拷贝/μl以上的16SrDNAs基因都可以准确定量;以该方法检测血液细菌污染模拟标本,灵敏度可达到105CFU/ml。结论初步建立了以16SrDNAs作为FQ-PCR靶基因快速检测血液细菌污染的方法。该方法特异性强、灵敏度高、成本低廉,具有很好的研究价值与应用前景。

主 题 词：细菌污染 16S rDNAs 荧光定量PCR 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-1358.2007.04.004

馆 藏 号：203512312...