重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达、纯化和鉴定

作     者：王宏坤 朱平 李晓燕 郑朝晖 贾俊峰 吴振彪 

作者机构：第四军医大学西京医院临床免疫科西安710032 

出 版 物：《陕西医学杂志》 (Shaanxi Medical Journal)

年 卷 期：2006年第35卷第11期

页      码：1407-1410页

摘      要：目的:表达与纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(rhCⅡ250-270),鉴定并确认rhCⅡ250-270多肽与预期的相符。方法:在*** BL 21中表达rhCⅡ250-270多肽,使用亲和层析法分离纯化。用限制性酶切、聚合酶链式反应(PCR)、基因序列测定、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹等方法在基因和蛋白水平上对rhCⅡ250-270多肽进行鉴定。结果:纯化的rhCⅡ250-270多肽,大小约43 kD,纯度为89.3%。E coRⅠ和SalⅠ双酶切法和PCR法鉴定测得DNA大小约为500bp和650bp,核苷酸序列测定证实基因DNA序列与设计的完全相符。SDS-PAGE显示rhCⅡ250-270多肽目的蛋白条带的大小约为43 kD,W estern B lotting证实GST融合蛋白上存在CⅡ片段。结论:表达和纯化rhCⅡ250-270多肽与预期的相符,并发现此多肽具有较强的免疫原性。

主 题 词：胶原Ⅱ型/分离和提纯 类风湿关节炎/免疫学 肽类/免疫学 色谱法 亲和/方法 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-7377.2006.11.003

馆 藏 号：203516895...