采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因的研究

作     者：崔大祥 闫小君 苏成芝 CUI Da-Xiang;YAN Xiao-Jun;SU Cheng-Zhi

作者机构：第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：1999年第7卷第2期

页      码：139-144页

摘      要：目的建立优化的ｍＲＮＡ差示ＰＣＲ条件；运用建立的条件及ＧＱＳ９６００分离胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ１细胞株之间的差异表达基因片段；根据获取的序列，设计引物并运用于胃癌组织、血、活检胃粘膜标本检测，拟从中筛选出检出率与符合率高的数对引物，建立胃癌基因诊断方法．方法以胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ１细胞株为研究对象，探索ｍＲＮＡ差示ＰＣＲ的最佳反应条件，运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因片段；以回收的片段作探针，打点杂交证实为真正的差异片段后，对纯化产物进行直接序列分析及ＧｅｎＢａｎｋ同源性检索，同源性低的序列递交给ＧｅｎＢａｎｋ；设计引物，采用ＲＴＰＣＲ方法对胃癌组织、血、活检胃粘膜进行检测，筛选出检出率与符合率高的５对引物建立多重ＰＣＲ诊断胃癌方法．结果①优化的差示ＰＣＲ条件为：前５轮ＰＣＲ循环采用９４℃３５ｓ，４０℃２ｍｉｎ，７２℃３０ｓ，后３５轮ＰＣＲ循环采用９４℃４５ｓ，５５℃２ｍｉｎ，７２℃１ｍｉｎ，最后在７２℃延伸７ｍｉｎ；②确认并分离出差异条带１５４条，胃癌细胞株泳道中存在而胃粘膜细胞株泳道中缺失的有８２条，胃粘膜细胞株泳道中存在而胃癌细胞株泳道中缺失的有３５条，胃癌细胞株泳?

主 题 词：胃癌 诊断 差异PCR 基因诊断 差异表达基因 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-3079.1999.02.017

馆 藏 号：203518203...