具有抗血管新生活性的K5突变体GST-K5M5基因的构建、表达及纯化

作     者：黄莉钧 石丁波 姚亚超 李磊 戴智育 张婷 高国全 杨霞 

作者机构：中山大学中山医学院生物化学教研室广东广州510080 热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080 海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东广州510080 

基　　金：科技部新药创制重大专项(2013ZX09102-053) 国家自然科学基金(30971208 30973449 81172163 81272515 81272338) (教育部)高等学校博士学科点专项科研基金(20100171110049 201201171110053) 广东省自然科学基金(10251008901000009 S2012010009250) 广东省科技计划项目(2011B031200006) 广州市科技计划项目(12A52061519 2011Y1-00017-8) 教育部高校基本科研业务费中山大学青年教师培育项目(10YKPY28) 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2013年第13卷第2期

页      码：133-139,161页

摘      要：目的构建可溶性的人纤溶酶原Kringle 5(K5)突变体GST-K5M5基因,并在单位体积的原核系统中获得高表达、高纯度、可水溶的融合GST-K5M5蛋白粉针剂。方法 K5M5突变体基因(模板已经对K5N端5个带负电的酸性氨基酸进行中性氨基酸丝氨酸的中性突变),通过PCR从本实验室保存的pET22b(+)/K5mut5 cDNA模板中扩增得到,再克隆到pGEX-4T-1/BL21(DE3)原核表达系统中。用自动诱导培养系统诱导其表达,提高产量。通过GST树脂亲和层析柱分离,双蒸水透析纯化,再制成冻干粉剂保存。结果该重组GST-K5M5蛋白的分子量为37000Mr,通过SDS-PAGE和Western-blot可以检测到其存在。冻干粉复溶的GST-K5M5呈剂量依赖抑制内皮细胞的增殖。结论在以前的研究基础上设计并用自动诱导培养的方法在大肠杆菌中表达纯化出了GST-K5M5融合蛋白,得到的GST-K5M5蛋白产量高、纯度高、可溶性好、生物学效应强,且方法简便、经济,为工业大规模发酵提供了基本参数。

主 题 词：K5突变体 融合蛋白GST—K5M5 自动诱导培养 水溶性 冻干粉 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

馆 藏 号：203519550...